Efsanevi arkeolog Indiana Jones, babası Dr. Henry Jones’tan gelen gizemli bir günlükle sarsılır. Bu defter, antik Kutsal Kase’nin izini süren ipuçları ve haritalarla doludur. Babasının esrarengiz bir şekilde ortadan kaybolduğunu öğrenen Indy, yanına dostu Marcus Brody’yi alarak İtalya’ya doğru yola çıkar.

İtalya’da kendilerini bekleyen büyük bir tehlikeyle karşılaşırlar: Bölge, Kutsal Kase’nin peşindeki Nazilerin kontrolü altındadır. Babasını bulmak için Nazilerle zamana karşı yarışan Indiana, aynı zamanda kutsal emanetin düşman eline geçmesini engellemek zorundadır. Babasıyla yeniden bir araya gelen Indy, onu kurtarmak ve efsanevi Kase’ye ulaşmak için tehlikeli bir maceraya atılır.

Baba-oğul, hem birbirlerine güvenmeyi öğrenir hem de Nazilere karşı amansız bir mücadele verir. Sonu, hem kişisel bir kurtuluş hem de tarihi bir hazinenin kaderi üzerine kurulu nefes kesici bir serüvendir.